Nơi sinh của bà có nhiều nghi vấn, bao gồm Wulfhall, Wiltshire và trang trại West Bower[1]. Bà là con gái của Ngài John Seymour, xuất thân từ gia đình quý tộc Anglo-Norman phục vụ từ thời Henrry VII và quý bà Margery Wentworth, có họ hàng với mẹ Anne Boleyn là Elizabeth Howard. Theo nguồn gốc dòng tộc họ mẹ, Jane là hậu duệ của Lionel, Công tước Clarence - một người con trai của Vua Edward III của Anh. Vì lý do này, Jane và người chồng tương lai Henry VIII là họ hàng 5 thế hệ. Ngoài ra, Jane cũng có chung bà cố Elizabeth Cheney với hai người vợ khác của Henry là Anne Boleyn và Catherine Howard[2].

Bà không được giáo dục một cách đầy đủ và bài bản như hai người vợ trước của Henry, Catherine xứ Aragon và Anne Boleyn. Jane được ghi nhận có thể viết một chút, và thông thạo công việc nội trợ như may vá, những kỹ năng được cho là phù hợp hơn đối với phụ nữ thời bấy giờ[3]. Vào thời niên thiếu, Jane cũng như bao cô gái quý tộc khác đến triều đình của Henry và phục vụ cho Vương hậu Catherine, sau đó là Anne Boleyn. Thời gian Vua Henry VIII bắt đầu chú ý và tán tỉnh Jane là khoảng tháng 2 năm 1536, chỉ 3 tháng trước khi Anne Boleyn bị xét xử và tử hình.

Jane Seymour được xưng tụng và kính nể vì tính tình hiền diệu, John Russell tán tụng bà là "người phụ nữ hiền diệu nhất mà tôi từng gặp" [4] và được gọi là The Pacific ("Sứ giả hòa bình") bởi Eustace Chapuys khi ông ta chứng kiến bà hay hòa giải các cuộc xung đột tại triều đình nước Anh[5]. Theo Chapuys, Jane Seymour có dáng người trung bình và khá mảnh mai, nhan sắc không đến mức quá xinh đẹp. Tuy nhiên, John Russell nhận định bà là người đẹp nhất trong các bà vợ của Henry[6][7].

Năm 1536, ngày 20 tháng 5, Jane đính hôn với Vua Henry, chỉ một ngày sau khi Anne Boleyn bị tử hình. Hôn lễ diễn ra ở Cung điện Whitehall vào ngày 30 tháng 5 cùng năm. Để dành làm qua cho Jane, Vua Henry ban cho bà 104 thái ấp ở 4 tỉnh hạt của nước Anh, bên cạnh đó là nhiều khu rừng và bãi săn dành cho gia đình bà, đây cũng là nguồn thu nhập chính riêng của bà khi trở thành Vương hậu[8]. Khi ấy ở nước Anh đang có bệnh dịch, nên Jane chưa từng được tổ chức lễ sách lập, và nhà vua có vẻ không muốn chính thức làm lễ khi Jane chưa hoàn thành nghĩa vụ của mình: sinh hạ người thừa kế.